紫外檢測儀的原理及其優(yōu)缺點(diǎn)
紫外檢測儀是應(yīng)用最廣泛的檢測器,絕大部分藥物在該檢測器中都有響應(yīng),那么大家了解紫外檢測儀的原理及其優(yōu)缺點(diǎn)嗎?下面小編就為大家簡單介紹一下。
紫外檢測儀的原理:
原理遵循的是朗伯比爾定律:當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比。
如果厚度固定,公式可表示為A=kc。也就是說,理論上供試品的響應(yīng)值與濃度做線性回歸的話,應(yīng)該是一條經(jīng)過原點(diǎn)的曲線。這就是含量測定外標(biāo)法的理論依據(jù),但實(shí)際上由于儀器的進(jìn)樣誤差、人員操作誤差、流動(dòng)相的本底吸收等因素的影響,線性不可能經(jīng)過原點(diǎn),線性方程中都有一個(gè)不是零的截距。
這就是對照品濃度和供試品濃度應(yīng)接近的原因,線性如果經(jīng)過原點(diǎn),任何對照品的濃度都可以用來測定供試品的結(jié)果。線性不經(jīng)過原點(diǎn),對照品濃度與供試品濃度相差越大,計(jì)算結(jié)果誤差越大。由這個(gè)討論我們又扯出另一個(gè)話題,就是有關(guān)物質(zhì)檢測項(xiàng)的自身對照溶液濃度應(yīng)該是多少的問題。
比如原料藥,有將供試品稀釋1000倍,有稀釋100倍的,到底哪個(gè)濃度合適?我想之前的討論可以給出一個(gè)合理的答案了,就是如果截距很小,二者區(qū)別不大,隨便那個(gè)濃度都可以。
如果截距較大,則應(yīng)選擇和雜質(zhì)規(guī)定限度附件的濃度,一般是稀釋1000倍。較小或者較大怎么判斷,個(gè)人認(rèn)為可以5%為分界線。當(dāng)然,最終還是看回收率的結(jié)果,能夠滿足回收率的要求就可以。
紫外檢測儀的優(yōu)缺點(diǎn):
優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)很多,讓人印象深刻的就是憨厚,等度梯度緩沖鹽隨便用,好說話的一塌糊涂。還有就是供試品的量與響應(yīng)者呈良好線性,方便計(jì)算檢測結(jié)果。另外適用范圍較廣,只要有紫外吸收的物質(zhì)都可以應(yīng)用。
缺點(diǎn)不多,個(gè)人認(rèn)為最大的缺點(diǎn)只有兩個(gè):一個(gè)是樣品必須有紫外吸收,另外一個(gè)就是對流動(dòng)相有一定的要求,流動(dòng)相的紫外吸收應(yīng)盡可能的小,否則會有較大的本底吸收。
本底吸收也是截距的一大來源,樣品的響應(yīng)等于本身的吸收減去流動(dòng)相本底吸收,如果本底吸收為固定值b的話,樣品在儀器上實(shí)際的響應(yīng)者為A=kc-b。
流動(dòng)相的影響在有關(guān)物質(zhì)檢測中較為明顯,因?yàn)殡s質(zhì)量小,響應(yīng)弱,流動(dòng)相的影響就較大,這個(gè)需要注意。就是說開發(fā)方法時(shí)檢測波長應(yīng)盡可能大于流動(dòng)相的截止波長。
以上就是小編的介紹,希望對大家了解紫外檢測儀有所幫助。
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